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新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗(yàn)方法
發(fā)布日期：
2020-08-27
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新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗(yàn)方法：
采用如下方法做羊水細(xì)胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細(xì)胞：
1、取羊水20ml， 以120xg離心十分鐘。
2、在無(wú)菌操作臺(tái)操作，棄上清液。
3、加入2ml羊水培養(yǎng)基，輕輕 混勻，制成細(xì)胞懸液。
4、取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標(biāo)記（包括編號(hào)、姓名、日期等）。
5、滴加0.5ml細(xì)胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片（25px2）中央，用移液管尖小心攤開(kāi)。注意液體不能流出蓋玻片。
6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
7、24小時(shí)后，給每塊蓋玻片補(bǔ)加1.5ml培養(yǎng)基。
8、接種7天后觀察細(xì)胞。當(dāng)發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細(xì)胞克隆數(shù)大于10個(gè)，每個(gè)克隆細(xì)胞數(shù)大于300且克隆邊沿細(xì)胞呈旺盛分裂狀態(tài)時(shí)，即可收獲細(xì)胞。否則，繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當(dāng)克隆邊沿細(xì)胞融合度大于90%，呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時(shí)，意味細(xì)胞已經(jīng)老化，不適合用作分析。
9、適合收獲的細(xì)胞按常規(guī)方法使細(xì)胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細(xì)胞片，經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。
